Ovulation Test

USAGE IN VITRO UNIQUEMENT

 

Ovulation Test


INTERET CLINIQUE

DETERMINATION DE LA PERIODE FERTILE CHEZ LA CHIENNE

Les signes physiques de chaleurs (congestion vulvaire, écoulements vaginaux, attraction du mâle) sont des indications approximatives qui ne suffisent pas à déterminer le moment optimal de la saillie chez la chienne. De plus, une grande variabilité individuelle compliqueles prévisions d'insémination: 20 % des chiennes ovulent «en dehors» de la période comprise entre le 10ème et le 14ème jour des chaleurs. Ainsi, le frottis vaginal, indispensable pour confirmer les phases de pro-oestrus et d'oestrus, et le dosage de la progestérone permettent de programmer la saillie ou l'insémination pour avoir un résultat optimal.

Le pic de LH (Hormone Lutéinisante) précède l'ovulation, qui a généralement lieu dans les 2 jours. La maturation des ovocytes dure en moyenne 2 à 3 jours après l'ovulation et ils restent fécondables pendant 48 à 72 heures. Ainsi la période fertile se situe 2 à 5 jours après l'ovulation. La gestation ne sera donc possible qu'en présence d'ovocytes fécondables (2 jours en moyenne après l'ovulation) et de spermatozoïdes vivants (5 jours en moyenne).

Avant ovulation, le taux de progestérone est compris entre 0 et 1 ng/ml. Au moment du pic de LH, le concentration de progestérone circulante va progressivement augmenter et atteindre 6 à 8 ng/mL au moment de l'ovulation. Après ovulation, le taux de progestérone augmente de plus en plus rapidement et reste élevé tout au long de la gestation. En fin de gestation, une baisse du taux de progestérone est généralement observée, allant jusqu'à devenir inférieur à 1 ng/ mL. Cette donnée, associée à la mise en évidence des prodromes de la mise bas (baisse de température corporelle, présence de lait blanc, suivi échographique) permet au praticien de supposer que la mise-bas aura lieu dans les 24 à 48 heures.

 

PRINCIPE
Ovulation Test est un test ELISA semi-quantitatif rapide sur membrane à lecture visuelle pour déterminer le taux de progestérone dans le plasma ou le sérum chez la chienne. Ce dosage vous aide à préciser le moment de l'ovulation et donc à prévoir la date de saillie ou d'insémination de la chienne. Ovulation Test est un excellent complément du frottis vaginal pour suivre l'évolution des chaleurs dans le temps.

PROTOCOLE OPERATOIRE 
POUR CHAQUE TEST PREVOIR
Une coupelle test, une pipette à usage unique, le flacon de Substrat A, le flacon de Substrat B, le flacon de Solution de Lavage 1, le flacon de Solution de Lavage 2, le flacon pour le mélange des substrats, le flacon de Conjugué et le nuancier de couleur. Avant de commencer le test, laisser les échantillons et les réactifs revenir à température ambiante (2h). Il est possible de laisser le kit à température ambiante toute la journée. Ne jamais mélanger des réactifs de lots différents.

Les temps d'attente des différentes étapes (surtout les étapes 1, 3 et 7) sont à respecter impérativement pour le bon fonctionnement du test et l'exactitude des résultats.

1/ Au moyen d'une pipette, ajouter 8 gouttes de sérum ou de plasma au centre de la coupelle. Attendre 2 minutes.

2/ Ajouter 4 gouttes de Solution de Lavage 1 au centre de la coupelle. Attendre que le liquide soit totalement absorbé. Répéter 1 fois ce lavage.

3/ Ajouter 3 gouttes de conjugué (flacon à bouchon rouge) au centre de la coupelle. Attendre 1 minute.

4/ Remplir la coupelle avec la Solution de Lavage 2 jusqu'à la limite inférieure du bord de la coupelle, soit environ 20 gouttes. Attendre que le liquide soit totalement absorbé.

5/ Préparer un substrat frais dans le flacon pour le mélange des substrats (étiquette bleue): ajouter une mesure de chaque substrat A et B (flacons à capuchons noirs) en remplissant chaque compte-gouttes jusqu'au trait noir. Bien agiter. Il est déconseillé de préparer le substrat à l'avance, car il se détériore après 30 minutes.

6/ Ajouter 4 gouttes de substrat fraîchement préparé au centre de la coupelle. Après 30 minutes, jeter toute solution inutilisée de substrat (flacon de mélange à étiquette bleue). Conserver ce flacon vidé pour les tests ultérieurs.

7/ Attendre 9 minutes pour lire le résultat. Lire le résultat à l'aide du nuancier coloré.

 

INTERPRETATION DES RESULTATS
Les couleurs du test correspondent aux niveaux de progestérone. Le nuancier coloré inclus dans le coffret est un guide lors de l'observation des changements de couleurs des tests réalisés.

Le tableau ci-dessous est un guide de suivis des chaleurs chez la chienne.

Couleurs   Concentration
de progestérone
correspondante
  Recommandations*
         
C1 Bleu vif   0 à 1 ng/ml   Niveau de base de la progestérone. Effectuer un nouveau test toutes les 48 heures jusqu'à obtention d'un résultat C2 (Bleu clair)
         
C2 Bleu clair   1 à 2,5 ng/ml   L'augmentation du taux de progestérone a débuté. Effectuer un nouveau test toutes les 24 heures jusqu'à l'obtention d'un résultat C3 (Bleu pâle)
         
C3 Bleu pâle   2,5 à 8 ng/m   Début de la maturation des ovules. Saillir ou inséminer avec du sperme frais dans 1 puis 3 jours. Avec du sperme congelé, inséminer dans 1, 3 et 5 jours
         
C4 Blanc   > 8 ng/ml   Saillir ou inséminer immédiatement. Attention, vous pouvez vous trouver en fin de période fertile

 

 *Le vétérinaire devra toujours tenir compte de l'historique, de l'examen clinique et/ou échographique et/ou de la cytologie vaginale de la chienne pour prendre une décision.

RECOMMANDATIONS

STABILITE/CONSERVATION
- 14 mois à partir de la date de fabrication. Conserver entre +2°C et +8°C. Ne pas congeler.
- La date de péremption est indiquée sur l'étiquette du kit.

ECHANTILLONS
- Prélever le sang dans un tube avec anticoagulant (héparine ou EDTA) ou dans un tube sec (sang total). Ne pas utiliser de tube de prélèvement à gel de séparation.
- Immédiatement après la prise de sang, homogénéiser les échantillons en retournant les tubes plusieurs fois. Centrifuger l'échantillon de sang ou laisser coaguler le sang total sur tube sec à température ambiante, séparer le sérum ou le plasma dans un tube propre. L'échantillon ne doit être ni hémolysé, ni lipémique (il doit être limpide).
- Conservation des échantillons jusqu'à 24 heures: conserver sérum ou plasma à température ambiante.
- Conservation des échantillons jusqu'à 72 heures: conserver sérum ou plasma à entre +2°C et +8°C (réfrigérateur).
- Au-delà de 72 heures, conserver sérum et plasma à -20°C.

QUAND TESTER
- Vérifier l'exactitude du stade de pro-oestrus à l'aide d'un frottis vaginal. Le frottis vaginal vous aide à identifier l'approche du pic LH et ainsi de commencer à évaluer le taux de progestérone.
- Un à deux tests sont généralement suffisants en sachant que l'ovulation se produit vers le 2ème jour après le pic LH (entre le 10ème et le 14ème jour après le début des chaleurs).
- La fréquence de réalisation de l'Ovulation Test sera évaluée pour chaque cas en fonction du stade des chaleurs, et des antécédents connus de l'animal.

PRÉCAUTIONS DE MANIPULATION
- Conserver le coffret en entier au réfrigérateur lorsqu'il n'est pas utilisé. Ne pas congeler.
- Re-sceller toujours hermétiquement le sachet des coupelles après en avoir pris une.
- Ne pas échanger les réactifs ou coupelles entre différents coffrets.

AUTRES RECOMMANDATIONS
Ces recommandations constituent un guide, aucune méthode de diagnostic ne pouvant prétendre être précise à 100 %. Ce test a pour but d'aider le vétérinaire praticien pour détecter le moment de l'ovulation et déterminer le moment optimal de saillie ou de l'insémination. L'interprétation du test par le vétérinaire devra toujours tenir compte des commémoratifs et de l'examen clinique et gynécologique de l'animal. La décision finale reste la prérogative et la responsabilité du vétérinaire traitant. Bio Véto Test et ses distributeurs ne peuvent être tenus responsables des conséquences liées à une mauvaise utilisation ou une mauvaise interprétation des résultats donnés par ce test.


Distributeur: Virbac AG, Europastrasse 15, 8152 Opfikon


Fabricant: Bio Veto Test, 285 Avenue de Rome, F-83500 La Seyne sur Mer